Jak stosuje się reakcje serologiczne do diagnozy?

Serologia (od lat. Serum - surowica), zwana nauką o właściwościach ludzkiej surowicy. Definicja reakcji serologicznych zostanie przedstawiona poniżej.

Jednym z głównych zadań serologii jest dzisiaj opracowanie metod produkcji określonych surowic do diagnozy i leczenia, oceny stopnia ich aktywności i określenia mechanizmów narażenia na ludzi. Serologiczne badanie krwi jest laboratoryjną metodą badawczą do określania antygenów lub przeciwciał (specyficznych białek) zawartych w surowicy krwi pacjenta w materiale biologicznym pacjenta. Badania serologiczne nie są uważane za całkowicie specyficzne i wrażliwe w diagnozowaniu chorób o charakterze zakaźnym. Dlatego ocena wyników badań jest możliwa tylko przy uwzględnieniu obrazu klinicznego choroby jako całości. Eksperci wolą przeprowadzić kilka testów w celu bardziej niezawodnej diagnozy.

Reakcje serologiczne - co to jest?

W diagnostyce laboratoryjnej większości chorób zakaźnych stosuje się metodę wykrywania przeciwciał we krwi pacjenta wytwarzanych przeciwko antygenom patogennym. Są stosowane w praktyce medycznej od początku XX wieku. Wraz z rozwojem nauki współcześni lekarze nauczyli się rozpoznawać antygeny w strukturze drobnoustrojów, a także ujawnili formułę chemiczną ich toksyn. Umożliwiło to opracowanie serum przeznaczonego nie tylko do leczenia, ale także do diagnozowania chorób zakaźnych. Surowica jest wytwarzana przez podawanie atenuowanych patogenów zwierzętom laboratoryjnym. Reakcje serologiczne są teraz bardzo popularne.

Po standardowym czasie ekspozycji na krew zwierząt laboratoryjnych wytwarza się leki. Są stosowane w reakcjach serologicznych do identyfikacji drobnoustrojów lub ich toksyn. Metoda opiera się na odpowiedzi immunologicznej organizmu ludzkiego. Badanie to stosuje się w diagnozowaniu chorób o charakterze zakaźnym w celu wykrycia obecności lub braku przeciwciał u pacjenta przeciwko wirusom lub bakteriom, a także w celu ustalenia grupy krwi. Zewnętrzne objawy reakcji serologicznych zależą od warunków i stanu, w którym antygeny znajdują się we krwi pacjenta. Jeśli drobnoustroje nie rozpuszczą się, wytrącają się, ulegają lizie, wiążą się lub unieruchamiają w surowicy. Jeśli nastąpi rozpuszczenie antygenów, wówczas ujawnia się zjawisko neutralizacji lub wytrącania. Reakcje serologiczne były stosowane od dawna.

Materiał do nauki

Podczas przeprowadzania badania serologicznego stosuje się cząstki materiału biologicznego zebrane od pacjenta: krew, ślina, kał. W niektórych przypadkach badany jest materiał zgromadzony w niektórych obiektach środowiskowych: woda, ziemia.

Jak dokładnie zachodzą reakcje serologiczne w mikrobiologii?

Technika pobierania próbek materiału biologicznego

Dzięki tej analizie nie ma potrzeby specjalnego przygotowania pacjenta. Pobieranie krwi odbywa się rano przed posiłkami w sali zabiegowej placówki medycznej przy użyciu ogólnie przyjętych metod hematologicznych. Do tej analizy pobieranie krwi odbywa się dwoma metodami: krew żylna jest pobierana z żyły łokciowej, a krew włośniczkowa pobierana z palca. Materiał do analizy znajduje się w sterylnych, zamkniętych probówkach.

Co jest potrzebne do oceny reakcji serologicznych?

Funkcje transportu i przechowywania materiału biologicznego

Natychmiast po pobraniu krwi jest ona transportowana do specjalnego laboratorium, w którym surowicę przygotowuje się tego samego dnia. Można go przechowywać nie dłużej niż cztery lub sześć dni w lodówce w temperaturze od 2 do 4 stopni. Jeśli chcesz zatrzymać surowicę przez dłuższy czas, to jest zamrożona. Aby nie naruszać jakości materiału biologicznego, zamrażanie i rozmrażanie można wykonać tylko raz. Długotrwałe przechowywanie powoduje, że przeciwciała są nieaktywne i tracą część swoich właściwości. Immunoglobuliny klasy M są uważane za najbardziej wrażliwe na niższe temperatury przechowywania.

Po rozmrożeniu serwatka jest dobrze mieszana w celu uzyskania jednolitego składu. Pomaga to przywrócić stężenie przeciwciał zawartych w tym materiale.

{$adcode4}

Testy serologiczne - do czego służą?

Metodologię reakcji serologicznych stosuje się do diagnozowania bąblowicy, włośnicy, toksokarozy, opisthorchiasis, torbielowicy, toksoplazmozy, amebiazy, lambliozy. Jest to wymagane w celu ustalenia skuteczności zalecanego przebiegu leczenia, a także w celu wykrycia nawrotu choroby, która nastąpiła po wyzdrowieniu pacjenta. Gdzie jest najczęstsze zastosowanie reakcji serologicznych?

Podstawowe metody diagnostyczne

W większości przypadków mikrobiologowie i immunolodzy stosują aglutynację, wytrącanie, neutralizację, reakcje dopełniacza za pomocą znakowanych przeciwciał i antygenów (radioimmunologiczne, enzymatyczne testy immunologiczne, metody immunofluorescencyjne).

Reakcja aglutynacji (RA)

Testy serologiczne aglutynacji są dość proste, a jednocześnie bardzo wizualne. Pozwala to szybko ustalić, czy surowica krwi pacjenta zawiera antygeny. Reakcja służy do diagnozowania duru brzusznego, duru brzusznego i tyfusu. Opiera się na specyficznej interakcji między ludzkimi przeciwciałami (aglutyniny) a drobnoustrojami (aglutenogeny). W procesie ich interakcji wytrąca się tworzenie cząstek. To pozytywny znak. Do reakcji można użyć żywych lub zabitych środków drobnoustrojowych, grzybów, pierwotniaków, komórek krwi i komórek somatycznych. Badania chemiczne przeprowadzane są w dwóch etapach: w pierwszym etapie przeciwciała łączy się z antygenami, a następnie wytrąca się (powstaje aglutynat) podczas reakcji.

Serologiczna metoda diagnostyczna może być inna.

{$adcode5}

Pośrednia reakcja aglutynacyjna (RPHA)

Ta reakcja jest uważana za bardziej wrażliwą niż poprzednia. Służy do diagnozowania chorób powodujących różne bakterie, pasożyty wewnątrzkomórkowe, pierwotniaki. Ta analiza pozwala wykryć stężenie przeciwciał nawet w bardzo małych ilościach. Do jego realizacji konieczne jest użycie oczyszczonych erytrocytów owiec i ludzkich czerwonych krwinek, wstępnie poddanych działaniu przeciwciał lub antygenów (w zależności od tego, co chcą znaleźć w laboratorium). W niektórych przypadkach stosuje się ludzkie erytrocyty traktowane immunoglobulinami. Reakcja serologiczna czerwonych krwinek jest uważana za zakończoną, jeśli czerwone krwinki wytrącają się na dnie probówki. Gdy komórki znajdują się w formie odwróconej kopuły i zajmują całe dno rurki, oznacza to reakcję dodatnią. Reakcja ujemna jest brana pod uwagę, jeśli czerwone krwinki osadzają się w postaci kolumny lub przycisku na środku dna.

Reakcje serologiczne na kiły są wykonywane.

Reakcja opadowa (RP)

W celu wykrycia bardzo małych cząstek antygenów stosuje się reakcję strącania. Może to być białko (lub jego część), związki białek, lipidów lub węglowodanów, częściowo reprezentowane bakterie i ich toksyny. Surowicę do analizy z zastosowaniem tej reakcji uzyskuje się przez zakażenie zwierząt laboratoryjnych, zwykle królików. Metodę tę stosuje się do uzyskania prawie każdej surowicy precypitującej.

Mechanizm serologicznej reakcji strącania jest podobny w skutkach do reakcji aglutynacji. Przeciwciała zawarte w surowicy miesza się z antygenami w roztworze koloidalnym, łącząc się w duże cząsteczki białka. Cząsteczki te osiadają na dnie probówki lub na podłożu żelowym. Ta opcja badawcza jest uważana za bardzo dokładną, a za jej pomocą można wykryć nawet niewielkie dawki substancji. Reakcja wytrącania, również rozpowszechniona w medycynie sądowej, pozwala zdiagnozować dżumę, tularemię, wąglika i zapalenie opon mózgowych.

Reakcje tego typu są przeprowadzane nie tylko w środowisku płynnym, ale do tego celu stosuje się żel agarowy. Ta procedura nazywa się metodą strącania rozproszonego. Umożliwia badanie złożonych mieszanin antygenowych. W żelu przeciwciała i antygeny przemieszczają się do siebie z różnymi prędkościami, a kiedy się spotykają, tworzą linie wytrącania, i taki jest wniosek.

{$adcode6}

Jaka inna metoda reakcji serologicznej jest znana?

Reakcja neutralizacji (pH)

Serum o właściwościach antytoksycznych neutralizuje działanie egzotoksyn wytwarzanych przez mikroorganizmy. Reakcja serologiczna tego typu opiera się na tej interakcji. W mikrobiologii metoda ta jest stosowana do miareczkowania surowic, toksyn i toksoidów, a także do wskazania ich aktywności terapeutycznej. Ponadto za pomocą tej reakcji można ustalić, czy egzotoksyna należy do określonego gatunku lub typu. W ten sposób diagnozuje się tężec, błonicę i zatrucie jadem kiełbasianym. Badanie przeprowadza się zarówno na tablecie, jak i na podłożu żelowym.

Reakcje serologiczne są również wykorzystywane do innych analiz.

Reakcja lizy (RL)

Surowica, która wchodzi do organizmu pacjenta, oprócz głównego zadania funkcjonalnego - zapewnia bierną odporność, a także właściwości rozpuszczające. Przyczynia się do rozpuszczania drobnoustrojów, obcych elementów komórkowych i wirusów dostających się do ciała pacjenta. W zależności od składu przeciwciał surowice dzielą się na bakteriolizyny, cytolizyny, spirochetolizyny, hemolizyny i inne. Te przeciwciała nazywane są komplementami. Przeciwciała zawierają prawie wszystkie płyny ludzkiego ciała, mają złożoną strukturę białkową i są bardzo wrażliwe na wzrost temperatury, drgania, ekspozycję na kwas i bezpośrednie światło słoneczne. Ale w stanie suchym są w stanie zachować swoje właściwości lizujące przez okres do 6 miesięcy.

Przeprowadzane są następujące serologiczne reakcje krwi tego typu: bakterioliza, hemoliza.

{$adcode7}

Reakcja bakteriolizy jest przeprowadzana przy użyciu surowicy krwi pacjenta i swoistej surowicy odpornościowej z aktywnymi drobnoustrojami. Jeśli we krwi jest wystarczająco dużo komplementu, technik laboratoryjny będzie świadkiem lizy bakterii, a reakcja zostanie uznana za pozytywną. Drugi rodzaj reakcji serologicznej tego typu polega na tym, że erytrocyty pacjenta są przetwarzane za pomocą surowicy, która zawiera hemolizyny, które są aktywowane tylko wtedy, gdy istnieje jakiś komplement. Jeśli jest obecny, badacz obserwuje rozpuszczanie czerwonych krwinek. Metodę tę stosuje się podczas reakcji Wassermanna (kiła).

Compliment Binding Reaction (CSC)

Badanie to służy do wykrywania przeciwciał przeciw infekcji we krwi pacjenta i do identyfikacji patogenów na podstawie ich struktury antygenowej. Wszystkie opisane wcześniej reakcje są uważane za proste. CSC jest złożoną reakcją, ponieważ oddziałuje nie z dwoma, ale z trzema składnikami: przeciwciałem, antygenem i komplementem. Jego istotą jest interakcja między przeciwciałem a antygenem, która zachodzi tylko w obecności białek komplementarnych zaadsorbowanych na powstałym kompleksie AG-AT. Antygeny po dodaniu komplementu znacznie się zmieniają, to właśnie te transformacje pokazują jakość reakcji. Może to być liza, hemoliza, unieruchomienie, działanie bakteriobójcze lub bakteriostatyczne.

Powyższe reakcje różnią się między sobą techniką formułowania, ale wszystkie z nich zasadniczo mają reakcję interakcji antygenu i przeciwciał i służą do ich identyfikacji. Istnieje kilka innych rodzajów reakcji serologicznych o podobnej zasadzie działania.